本標準規(guī)定了食品中蛋白質(zhì)的測定方法。
本標準第一法和第二法適用于各種食品中蛋白質(zhì)的測定,第三法適用于蛋白質(zhì)含量在10g/100g以上的糧食、豆類奶粉、米粉、蛋白質(zhì)粉等固體試樣的測定。本標準不適用于添加無機含氮物質(zhì)、有機非蛋白質(zhì)含氨物質(zhì)的食品的測定。（點擊圖片查看標準詳情）
第一法 凱氏定氮法
原理:食品中的蛋白質(zhì)在催化加熱條件下被分解,產(chǎn)生的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后以硫酸或鹽酸標準滴定溶液滴定,根據(jù)酸的消耗量計算氮含量,再乘以換算系數(shù),即為蛋白質(zhì)的含量。
| 水 |
| 為GB/T 6682規(guī)定的三級水 |
| 五水硫酸銅 |
| CuSO4·5H2O,7758-99-8，分析純 |
| 甲基紅 |
| – |
| 亞甲基藍 |
| – |
| 硫酸標準滴定溶液 |
| 硫酸標準滴定溶液[c(1/2H2SO4)0.0500 mol/L |
| 硫酸鉀 |
| K2SO4，分析純 |
| 硫酸 |
| H2SO4，分析純 |
| 硼酸 |
| H3BO3，分析純 |
| 甲基紅指示劑 |
| C15H15N3O2，分析純 |
| 溴甲酚綠指示劑 |
| C21H14Br4O5S，分析純 |
| 亞甲基藍指示劑 |
| C16H18ClN3S·3H2O，分析純 |
| 氫氧化鈉 |
| NaOH，分析純 |
| 乙醇 |
| 95%，C2H5OH，分析純 |
| 漏斗 |
| – |
| 石棉網(wǎng) |
| – |
| 容量瓶 |
| 100 mL |
| 玻璃珠 |
| – |
| 溴甲酚綠 |
| – |
| 天平 |
| 感量為1mg |
| 定氮蒸餾裝置 |
| – |
| 定氮儀 |
| 自動凱氏定氮儀 |
第二法 分光光度法
原理:食品中的蛋白質(zhì)在催化加熱條件下被分解,分解產(chǎn)生的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨,在pH4.8的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液中與乙酰丙酮和甲醛反應生成黃色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氫化毗啶化合物。在波長400nm下測定吸光度值,與標準系列比較定量,結(jié)果乘以換算系數(shù),即為蛋白質(zhì)含量。
| 水 |
| 為GB/T 6682規(guī)定的三級水 |
| 五水硫酸銅 |
| CuSO4·5H2O,7758-99-8，分析純 |
| 容量瓶 |
| 100 mL |
| 移液管 |
| – |
| 比色管 |
| 10ml具塞玻璃 |
| 氨氮標準溶液 |
| 氨氨標準儲備溶液(以氮計)(1.0g/L) |
| 硫酸鉀 |
| K2SO4，分析純 |
| 硫酸 |
| H2SO4，優(yōu)級純 |
| 氫氧化鈉 |
| NaOH，分析純 |
| 對硝基苯酚 |
| C6H5NO3,100-02-7,分析純 |
| 三水合乙酸鈉 |
| C2H3O2Na·3H2O，6131-90-4 ,分析純 |
| 乙酸鈉 |
| 無水乙酸鈉,CH3COONa，分析純 |
| 乙酸 |
| CH3COOH，優(yōu)級純 |
| 甲醛 |
| 37%，HCHO，分析純 |
| 乙酰丙酮 |
| acetylacetone,C5H8O2,123-54-6 |
| 分光光度計 |
| – |
| 水浴箱 |
| 電熱恒溫水浴鍋,100℃±0.5℃ |
| 天平 |
| 感量為1mg |
| 定氮瓶 |
| 100 mL或250 mL |
| 漏斗 |
| – |
| 石棉網(wǎng) |
| – |
| 容量瓶 |
| 50 mL或100 mL |
| 比色管 |
| 10 mL |
| 比色杯 |
| 1 cm |
第三法 燃燒法
原理:試樣在 900℃~1200℃高溫下燃燒,燃燒過程中產(chǎn)生混合氣體,其中的碳、硫等干擾氣體和鹽類被吸收管吸收,氮氧化物被全部還原成氮氣,形成的氨氣氣流通過熱導檢測器(TCD)進行檢測。
| 天平 |
| 感量為0.1mg |
| 錫箔 |
| – |
| 氧氣 |
| 高純氧大于99.99% |
| 蛋白質(zhì)分析儀 |
| 氮/蛋白質(zhì)分析儀 |
| 二氧化碳 |
| 載氣,或氦氣 |
| 氦氣 |
| 載氣 |
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